濾光片的原理、種(zhǒng)類(lèi)和選型
濾光片是在(zài)塑料或玻璃基材中加入(rù)特種染料或在(zài)其(qí)表麵蒸鍍光學膜製成,用以衰減(吸收)光波中的某些(xiē)光波段或以精(jīng)確選擇小範圍波段光波通過,
而反射(或吸收)掉其他不希望(wàng)通過的波段。通過改變濾光片的結構和膜層(céng)的光學參數(shù),可以(yǐ)獲得各種光譜特性,使濾光片可以(yǐ)控製、
調整和改變光波的透射、反射、偏振或相位狀態。濾光片的分類方法一般式按光譜(pǔ)波段、光譜特性、膜(mó)層材料、應用特點等特性進行分類(lèi)。
濾光片按照光譜(pǔ)特(tè)性分類可以分為帶通濾光片(如NBF-808,BPF940等)截止濾光片(如IBG-650)、二向分光濾(lǜ)光片(如半透(tòu)半反鏡(jìng))、
中性密度濾光片、反射濾光片等;濾(lǜ)光片按(àn)照光譜波段分類可以分為紫外波段濾光片、可見光(guāng)濾光片(piàn)和紅外波段濾光片;
濾光片按照應用膜層材料分類可以分為軟膜濾光片和硬膜濾光片;濾光片按照應用特點分類(lèi)可以分為醫用生化儀用濾光片、
熒光顯微鏡用濾光片、警用多波段硬膜濾光片等。
本文所談的濾光片指的(de)是各種(zhǒng)熒光濾光片,濾光片一般(bān)用於各種顯微鏡中,使人(rén)們能(néng)夠更方便的觀測各種熒光現象。
濾光片通常用到的顯微鏡有熒光顯微鏡、
激光掃描(miáo)共聚焦熒光顯微鏡(LSCM)、共聚焦顯微鏡、和全內反射熒光顯微鏡(TIRFM)。
濾光片的分類方法(fǎ):根據使用目的的不同,濾光片(piàn)可(kě)分為TIRF濾光片、幹涉濾光片、全內反射濾(lǜ)光片、Raman濾光片、拉曼濾光片、
FISH熒光濾光片和應原位雜交濾(lǜ)光片。根據濾光片本身功能的不同(tóng),其可分為激(jī)發濾光(guāng)片、發射濾光片、二向色鏡(jìng)/二向色濾光片/
二(èr)色鏡、陷(xiàn)波濾光(guāng)片、燃料濾光片、熒光素濾光片、ND濾光片、中性濾(lǜ)光片、中性灰度鏡、截止濾光片、高(gāo)通濾光片(piàn)、低通濾(lǜ)光片、
帶通濾光片、紫外濾光片和UV濾光(guāng)片。
根據主要應用領域,濾(lǜ)光片又可分為生物濾光片、醫學濾光片和(hé)天文學濾光片。
熒光(guāng)濾(lǜ)光片
用於生命科學和生物醫學領域,主要作用是在生物醫學熒光檢(jiǎn)驗分(fèn)析係統(tǒng)中分離和選擇物質的激發光與發(fā)射熒(yíng)光的特征波段(duàn)光譜。
中性灰度鏡,ND,濾光片,中性灰度鏡(neutraldensityfilter)又叫中灰密度鏡,其作用是均勻地過濾(lǜ)光線。這種濾光作用是非選(xuǎn)
擇性的,也就是說,ND鏡(jìng)對各種不同波長的光線的減少能力是同等的、均勻的,而對原物體的顏色不會產生(shēng)任何影響,可以真實
再現(xiàn)景物的反差。熒光原(yuán)位雜交濾光片,FISH濾光片
熒(yíng)光原位雜交技術(Fluorescenceinsituhybridization,FISH)是根據已知微生物不同分類級別上種群特異的DNA
序列(liè),以利用(yòng)熒(yíng)光標記(jì)的特異寡聚核苷酸片段作為探針(zhēn),與環(huán)境基因組中DNA分子雜交,檢測該特異微生物種群
的存在與豐度。陷波濾光片,Notch濾光片陷(xiàn)波濾光片通常用於拉曼光譜測試。通常也被稱作帶阻或者帶抑製濾光片。
它可以透過絕大多數波長,但是將特定波長範圍內(阻帶)的光衰減到非常低的水平。全內反射濾光片,TIRF濾光(guāng)片,
全(quán)內反射熒光(guāng)法濾光片用於全內反射熒光法顯微鏡,利用全內反射產生(shēng)的隱失波照明樣品
使照明區域限定在樣品表麵的一薄層範圍內,從而觀測到非常不易察覺的現象。優秀濾光片的特(tè)征:
1.和燃料(liào)的激發峰、發射峰匹配,且交疊小
2.截止深度深
3.自發(fā)熒光小(xiǎo)
4.透鏡麵形好,利於熒光(guāng)成像的提取。如果透鏡表麵的平整度不好,則會產生波前扭矩或楔角,波前扭矩會改(gǎi)變聚焦或成像位置,
一般透射波(bō)前扭矩(TWD)比反射波前扭矩(RWD)對成像(xiàng)的影響更加直接,也會有更嚴(yán)格的要(yào)求。
濾光片的原理(lǐ):
熒光濾光片一般采用單片無(wú)色透明的玻璃作為基底,
在玻璃的(de)兩個表麵鍍膜。
增反膜的厚度會選擇為半波長的整數倍,此時反射疊加(jiā)增強;增透膜的厚度為1/4波長的(de)倍數,此時投射疊(dié)加增強。濾光片(piàn)的激發和成像方式
熒光濾光片的激發和成像方式大體可分為如下三種:聚焦型:入射激(jī)發光聚焦在待測樣品上;寬場型:入射激發(fā)光束以較大的麵積打到樣品上
全內反射型(TIRF):激發光透(tòu)過樣品,觀(guān)測倏逝波(bō)成像